· полиакриламидгел акриламид мономери, полимерлөөнүн баштапкы материалы, катализатор жана туз менен буфер аралашмасынын укугу менен бирге болушу керек.
· акриламиджана BIS (N, N '- метилен кош акриламид) мономер формасындагы гел матрицасы.
· аммоний персульфаты жабышчаак полимеризация процессин баштоо.Желимди түзүү үчүн сууда даярдалган 10% аммоний персульфат эритмеси талап кылынат.Маалыматтардын көбү активдүү колдонуу зарылдыгын көрсөттү.Бирок, 10% эритмени 4℃ температурада бир нече жума бою активдүүлүгүн олуттуу жоготуусуз коюуга болот.10 мл чейин жасап, желим кошулбай калганда таштаңыз.
Кеңеш: Процентакриламидсеквенирлөөдө клей менен белок клей бирдей эмес.Эгерде алдын ала даярдалган акриламид: BIS эритмеси колдонулса, анда туура бөтөлкөнү алыңыз.
· TEMED (N, N, N ', N '- тетраметил этилендиамин) - катализатор, күрөң бөтөлкөдөгү, муздаткычка коюлган.Клей куюунун алдында эле кошуңуз.
· Электрофорезде колдонулган полиакриламиддик электрофорез айнекти ар бир жолудан мурун жана кийин жууш керек.Электрофорезден кийин жумшак щетка жана чүпүрөк менен ысык самындуу сууга жууп, дистилденген суу менен жууп, кургатуу керек.
· ным жана чаң көңдөй полимерди алып келиши мүмкүн.Электрофорездин алдында айнек плитаны айнек тазалоочу каражат менен тазалап, жумшак щетка менен сүртүңүз.Дистилденген суу менен жууп, кагаз салфетка менен жакшылап кургатуу керек.Кагаз менен сүртүүдөн мурун 70% этанол менен чайкоо тазалоого жана кургатууну тездетүүгө жардам берет.Акриламиддин үлгүлөрүн катары менен кошуңуз: BIS, суу, буфердик эритме, аммоний персульфаты, TEMED.Жакшылап чайкап, дароо куюп коюңуз.
Полимеризациядан мурун полиакриламидди газсыздандыруу зарыл эмес.(Акриламид мурун көбүктөрдү алып салуу үчүн вакуумга салынчу, анткени кычкылтек полимеризацияны токтотот.)
Горизонталдык клей чекитинин үлгүлөрү.
· Төмөнкү кутуга кара кагазды коюңуз, дагы даанараак көрүү үчүн үлгү тешигин жасоо үчүн кара фон.
· желим бак толтурулган буфер, коллоиддин үстүндө.
· эгерде четинде жарык болсо, жарыкты күйгүзүңүз, жарык коллоиддик жаркырап турсун.Үлгүнү пипеткага тартыңыз.
· автоматтык пиптинг аппаратын колдонуу.
· 10-200 м 1 суюктуктун кыймылдуу чекити үлгүдөгү пункттардын көпчүлүгүндө колдонулушу мүмкүн.Өтө кичинекей үлгү тешиктери үчүн (10μ1ден аз) клейди секвенирлөө үчүн колдонулган пипеткалардын узун баштары ыңгайлуураак.
· жай жылып жаткан суюктук менен дем алып, үлгүгө жаңы эле чөмүлдүрүлгөн пиптинг.Үлгү глицерин менен жабышчаак болуп көрүнүшү мүмкүн жана тез сордурганда пипетка башына аба көбүктөрү тартылышы мүмкүн.
· Пиптинг башын дем алгандан кийин үлгүлөр суюктуктун башын түтүктүн четине акырын жылдырат же сүртүүчү кагаз суюктуктун башын тамчылардын сыртына соруп алат.Үлгү соруп алуудан сак болуңуз.
Үлгүнү үлгүдөгү тешикке салыңыз
· Бир аз басымды кармап туруу үчүн пиптинг аппараты, суюктуктун башын бир аз жылдырыңыз.
· буферге киргизилген питинг баштары так тешиктерден бир аз жогору, оң басымды кармап турат.Пипетканын учу кичинекей тешикке киргизилиши мүмкүн.
· Үлгүлөрдү акырындык менен жана ырааттуу түрдө чыгарат.Пипетка учу чекит үлгүсүнүн тешигинин үстүнө коюлат жана үлгү тешикке чөгүп кетет.Түртүүнүн ордуна үлгүдөгү тешикти толтуруу үчүн үлгү чөгүп кетсин.
· суюк башы бар үлгүнүн акыркы тамчысынан кийин суюктук экинчи бутка жылат, суюктук акырындык менен көтөрүлөт, буферден чыгат
Кантип тик желим үлгүсүн алуу керек?
· тик желим чекити үлгү тешиктер айнек эки кесим ортосунда түзүлгөн.Өтө жука клейде пипетка башын эки айнек плитанын ортосуна киргизүүгө да болбойт.Глицеринге көңүл буруңуз!Пипетка башын үлгүдөгү тешиктин үстүнө коюп, үлгү тешикке чөгүп кетет.
· чекит үлгүсү алдында, полипропилен acyl гел үлгү тешик вертикалдык чекит коюу үчүн шектенбесек болот таза чайкалат.Полимерленбеген акриламидди жана үлгүдөгү тешиктин түбүндө пайда болушу мүмкүн болгон сууну жууп салыңыз.Суу үлгүдөгү тешикти кыйла кичирейте алат.25 мл же 50 мл шприц жана 18 калибрлүү ийнени колдонуңуз.Электрофорез буферин куюп, үлгүдөгү тешикти кылдаттык менен жууп салыңыз.
· Үлгү тешигин көрүү кыйын болушу мүмкүн, бирок ошол эле учурда калганы оңой.Ашыкча тешиктер бар болсо, үлгү буферин бромофенол көк менен сынаса болот.
Посттун убактысы: 31-март-2023